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懸浮培育的細(xì)胞或團(tuán)體單細(xì)胞懸液的裂解

日期：2025-01-13 07:31
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摘要：


懸浮培育的細(xì)胞或團(tuán)體單細(xì)胞懸液的裂解 
 
（1）于4℃以2000g離心5分鐘使聚在一起細(xì)胞，以10倍大小用冰預(yù)冷的無鈣鎂離子磷酸緩和沖突液懸沉淀，蕩滌細(xì)胞3次，每每均用大口徑的吸管輕輕吹打細(xì)胞沉淀，使其徹底散布。

（2）加蛋白酶K至終液體濃度為200μg/ml,充分混勻后置于37℃溫育30分鐘。蛋白酶K以儲存的方式保留，儲存液為20μg/ml蛋白酶K水溶液。
 
（3）參加與步驟b）所加RNA提出取得緩和沖突液體相同的蛋白酶克化緩和沖突液，用振動器迅疾混勻。姚氏用裝有21號針頭的皮下注射器抽吸細(xì)胞裂解物，再將其灌注聚丙烯管內(nèi)。重復(fù)3-4次，剪切DNA.

（4）估計細(xì)胞沉淀的大小，用10-20倍大小的RNA提出取得緩和沖突液重懸之。